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育龙网核心提示: 关键词临床实验关键词:SARS;生物防护“非典”震撼了中国大地,引起了一场巨大的冲击波,给我们医疗卫生事业留下了众多的教训和思考。

关键词临床实验

关键词:SARS;生物防护

“非典”震撼了中国大地,引起了一场巨大的冲击波,给我们医疗卫生事业留下了众多的教训和思考。对于检验医学界,在过去对于学科建设的理念上,更多的是重视质量治理,相对忽视生物安全治理,源于SARS引起严重的医院内感染和大量医务人员感染后的教训。因此建立临床实验室的生物防护措施,规定传染性标本处理方法,十分必要。鉴于SARSCOV极强的传染性,有关文件规定了严密的实验室条件和较高防护要求,但一般医院临床实验室条件相差甚远。其中最为关切的三个主要问题是:①SARS病人,或疑似病人确诊之前的一系列检验如何进行生物防范。②在现有条件下,综合性医院检验科能不能做SARS的病原学检测;③根据目前的实验条件,综合性医院检验科的其他传染性标本怎样进行生物防范。为了逐步努力实现临床实验室的生物防范,结合医院的实际情况,综述如下:

1传染性实验室的生物防范分级及适用范围

每类生物安全防护实验室根据所处理的微生物及其毒素的危害程度分为四级,依次为:一级最低,四级最高[1]。

1.1一级生物安全防护实验室

1.1.1实验室结构和设施、安全操作规程,安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物,如用于教学的普通微生物实验室等。

1.1.2一级生物安全防护实验室一般无须使用生物安全柜等专用安全设备。

1.1.3工作人员进实验室时应穿工作服,戴防护眼镜,手上有皮肤破损或皮疹时应戴手套。

1.1.4实验室设计和建造无非凡要求:有可开启的窗户,应设置纱窗,设洗手池,围护结构内表面应易于清洁。地面应防滑、无缝隙、不得铺设地毯。实验台表面应不透水、耐腐蚀、耐热,有专门放置生物废弃物容器的台。

1.2二级生物安全防护实验室或相当于P2实验室

1.2.1BSL-2适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。含漱液、血清和血液等样品的诊断检测。

1.3二级生物安全防护实验室的个人防护

1.3.1当微生物的操作不可能在生物安全柜内进行而必须采取外部操作时,为防止感染性材料溅出或雾化危害,必须使用面部保护装置。

1.3.2在实验室中应穿着工作服或罩衫等防护服。离开实验室时,防护服必须脱下留在实验室内,不得穿着外出,更不能携带回家。用过的工作服应先在实验室中消毒,然后统一洗涤或丢弃。

1.3.3当手可能接触感染材料、污染的表面或设备时应戴手套。如可能发生感染性材料的溢出或溅出,宜戴两副手套,不得戴着手套离开实验室。工作完全结束后方可除去手套,一次性手套不得清洁和再次使用。

1.4三级生物安全防护实验室安全设备和个体防护

1.4.1实验室中必须安装Ⅱ级或Ⅱ级以上生物安全柜。

1.4.2所有涉及感染性材料的操作应在生物安全柜中进行。当这类操作不得不在生物安全柜外进行时,必须采用个体防护与使用物理抑制设备综合防护措施。

1.4.3在进行感染性组织培养,有可能产生感染性气溶胶的操作时,必须使用个体防护设备。

1.4.4当不能安全有效地将气溶胶限定在一定范围内时,应使用呼吸保护装置。

1.4.5工作人员在进入实验室工作区前,应在专用的更衣室穿着背开式工作服或其他防护服。工作完毕必须脱下工作服,不得穿工作服离开实验室。可再次使用的工作服必须先消毒后清洗。

1.4.6工作时必须戴手套,一次性手套必须先消毒后丢弃。

1.4.7在实验室中必须配备有效的消毒剂、眼部清洗剂或生理盐水,且易于取用,可配备应急药品。

1.5四级生物安全防护实验室或相当于P4实验室:四级生物安全防护实验室分为:安全柜型实验室和穿着正压服型实验室。

1.5.1适用于对人体具有高度的危险性,通过气溶胶途径传播或传播途径不明,目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素。与上述情况类似的不明微生物,也必须在四级生物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再决定此种微生物或毒素,应在四级还是在较低级别的实验室中处理。

1.5.2个体防护要求

1.5.2.1在实验室中所有感染性材料的操作都必须在Ⅲ级生物安全柜中进行。假如工作人员穿着整体的由生命维持系统供气的正压工作服,则相关操作可在Ⅱ级生物安全柜中进行。

1.5.2.2所有工作人员进入实验室时都必须换上全套实验室服装,包括内衣、内裤、衬衣或连衫裤、鞋和手套等。所有这些实验室保护服在淋浴可离开实验室前必须在更衣室内脱下。

2生物安全柜

2.1Ⅱ级生物安全柜ClassⅡbiosafetycabinet:至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化,工作空间为高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时正面玻璃推拉窗打开一半,上部为观察窗,下部为操作窗口。外部空气由操作窗口吸进,而不可能由操作窗逸出。工作状态下遵守操作规程时既保证工作人员不受侵害,也保证实验对象不受污染。

2.2Ⅲ级生物安全柜ClassⅡbiosafetycabinet:至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化,工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。正面上部为观察窗,下部为手套箱式操作口。箱内对外界保持负压。可确保人体与柜内物品完全隔绝。

2.3生物安全柜和超净化工作台:超净工作台是给实验室提供一个洁净的工作环境,以便在里面进行无菌操作,因此结构相对简单。而生物安全柜除了超净工作台具备的功能外,主要是空气的高效过滤和全排式的空气流向,使有传染性实验标本对空气的污染不会危害操作者,达到生物防护的目的。因此传染性实验标本的操作超净工作台不能代替生物安全柜。

3SARS标本的采集、运送和处理[2~6]

3.1采集要求

3.1.1第一次采集住院病人的样品必须在入院后24h内进行;采集前应向病人说明采集目的。

3.1.2采集单位应指定专人负责样品登记、收集、治理,并认真填写《传染性非典型肺炎或密切接触者人体样品采集登记表》。

3.1.3送当地疾病预防控制机构的样品,置于螺口塑料试管,用胶布或封口膜密封,用清洁塑料袋包裹严实,再放在带有明确标识的不锈钢盒中盖紧送检。

3.1.4每份样品必须标明编号及采集日期。

3.1.5样品应立即送当地疾病预防控制机构,如不能立即送交,可置于冰箱20℃以下短暂保存。

3.2样品采集种类和方法

3.2.1体液样品:包括呼吸道和血液样品。

3.2.2呼吸道样品:包括鼻咽拭子、口咽拭子、痰液及下呼吸道样品。

3.2.2.1鼻咽拭子:将棉签平行于上颚插入鼻孔,保持几秒钟,吸收分泌物;拭抹双侧鼻孔。

3.2.2.2咽拭子:适度用力拭抹咽后壁和扁桃体部位,应避免触及舌部;迅速将棉签放入无菌、内装35ml样品运送液、带垫圈的螺口塑料管中;在靠近顶端处折断棉签杆,旋紧管盖并密封。

3.2.2.3痰液:将痰液吸入无菌、内装4~5ml样品运送液、带垫圈50ml螺口塑料管中,旋紧管盖并密封。

3.2.2.4下呼吸道样品收集气管吸取液或支气管灌洗液5~10ml放入无菌、带垫圈的50ml螺口塑料管中,立即密封。

3.2.3血液样品:血清、全血

3.2.3.1血清:采集5ml全血于带垫圈的螺口塑料管中,不加抗凝剂,待血液凝固后,分离血清,放置20℃以下冰箱中冷冻保存,血凝块高压灭菌后弃去。SARS病人采集时间:第一份血清应在入院后24h内采集,第二份血清应在发病后10~14d采集,第三份血清应在发病后22~28d或出院当日采集。

3.2.3.2全血:应在入院后24h内采集,采集5~10ml,全血放入已加抗凝剂、带垫圈的螺口管中;在4℃条件下立即送至有关实验室。

3.2.4粪便样品:采集5~10g粪便放入无菌塑料瓶内;在4℃条件下立即送至有关实验室。

3.2.5尸检组织样品:病人死亡后应尽早进行解剖,采集肺、气管、心脏、脾、肝、脑、肾和淋巴结等重要器官样品;每一个采集部位应更换消毒器械;每种组织应多部位采集,每份样品应采集20~50g,淋巴结2个,分别置于50ml无菌螺口塑料管中,立即放70℃以下保存或冷藏送至有关实验室。

3.3样品采集的防护措施

3.3.1样品采集时,采集人必须穿戴连体或隔离衣、防护鞋套、防护面罩或眼罩,N95级防护口罩和乳胶手套。

3.3.2样品采集完毕,先消毒并脱掉外层手套,再戴四层手套依次脱掉帽子、眼罩、口罩、衣裤和鞋套,最后脱掉内层手套,再用消毒剂搽拭面部和双手。

3.3.3防护材料要求

3.3.3.1防护服,使用防水面料防护服、鞋套,应选用较厚材质的产品。

3.3.3.2防护眼镜,应具备宽广视野、高透光度和防溅性。

3.3.3.3乳胶手套,外科手术用乳胶手套,防护口罩,符合“N95”标准。

3.3.3.4全面呼吸防护器,选用密封性能好、呼吸阻力较小的产品。

3.4样品的运输要求

3.4.1样品须进行三层以上的包装,样品采集后加无菌外包装,置于专用密闭盒内;用具有吸水性和柔软物质填充固定,置于保温箱内。

3.4.2由2人以上专人专车运送。

3.4.3短途运送加冰保冷即可,长途运送需加干冰保冷。

3.4.4空运需符合民航总局检疫部门有关传染性物质运输的规定。

3.5相关材料

3.5.1SARS样品运送液:牛血清5%,青霉素200U/ML,链霉素200UG/ML,制霉菌素25U/ml。用2%NaHCO3调PH值到7.4,如无样品运送液,也可使用等渗盐溶液或磷酸盐缓冲液。

3.5.2样品密封袋,专用样品运送箱,专用不干胶标签。注明传染性物质。

4检查后样品的废弃、标本的处理传染性生物实验室使用过的废弃物品、标本、垃圾,必须按其有无传染性分门别类地投放在指定的容器,并有明显的标志,然后按如下方式处理:

4.1带有传染性标本的一次性用品,如一次性手套、带传染性标本的一次性采血管、Tip头、反应板、纸盒、擦拭纸等要焚烧处理。

4.2不能一次性使用的,带有传染性标本的用品,如玻璃器皿、金属器皿、布类、试管等高压灭菌后洗涤。

4.3有传染性的标本如血清、尿液、胸水、腹水等按5%体积加漂白粉或者2%二氯异氰尿酸钠搅匀后作用2~4h,假如是肝炎、结核标本则要作用6h,再倒入厕所。假如是微生物的培养标本、培养物,则必须高压灭菌或彻底消毒后洗涤。污染的液体、废弃液、洗涤液等加10%的漂白水浸泡过液后才能排入下水道。

5临床实验室环境的清洁与消毒[5]

5.1空气消毒:室内有人时,首选开窗通风;不能开窗时安装大功率排风扇强行通风,并保证空气的单间流通;另外,可采用乳酸加热熏蒸,每日2次。室内无人时可采用以下消毒方法:

5.1.1低臭氧紫外线灯消毒:强度70uw/cm3,照射60min,天天2~3次。应注重安装适当的防护罩,避免医务人员发生电光性眼炎和其他损伤。

5.1.2化学消毒:含氯消毒剂:“健之素”1500mg/l喷洒消毒,用量30ml/m3,密闭30min后通风,天天3次。过氧化氢:0.5%过氧化氢溶胶喷雾,用量30ml/m3,密闭30min后通风,天天3次。

5.1.3有条件的实验室可采用静电吸附式空气净化器持续消毒,室内有无人时均适用。

5.2地面、台面、仪器的消毒

5.2.1墙壁、门窗消毒:用0.5%~1%过氧乙酸或“健之素”1500mg/l喷雾。地面消毒

5.2.2用1%过氧乙酸或“健之素”1500mg/l喷雾。先由外向内喷雾1次,用量为50~300ml/m3,之后再由内向外重复喷雾1次。以上各种方式的消毒处理,作用时间不少于30min。

5.2.3检验台、桌面、椅子及门把等物品:每日用0.2%0.5%过氧乙酸或“健之素”1500mg/L擦拭1~2次。

5.2.4检测仪器:当检测仪器完成检测后,仪器表面及进样口应用2000mg/L“健之素”擦拭数遍后再用清水擦拭。

5.2.5测样本用品:检测样本过程中所用一次性耗品在检测完成后,经10%漂白水浸泡消毒后放入废物容器内,再经高压消毒之后,作为废品丢弃。

5.2.6报告单:检验报告单需经过消毒后方可发出,可用环氧乙烷气体熏蒸,也可用微波炉消毒处理。具体方法是:先将被消毒的报告单用塑料袋密封,然后在塑料袋外用湿毛巾包裹,放入微波炉内,用低、中火档照射5min。如有条件,建议设立专门的清洁区打印报告单。

5.3其他注重事项

5.3.1安全离开实验室:离开实验室时将手套、口罩等放置于有“生物废品”标记的容器,经高压消毒后丢弃,并将隔离衣物留在室内,放在污物袋中消毒。检测样品不能擅自带离实验室,如必须移出,应妥善覆盖,以防在转移过程中污染环境和他人。实验室的物品固定使用,未经消毒或隔离包装不得移出实验室。所用物品需消毒后方可转用。污染物品应装在双层加厚坚固污物袋,消毒后送出销毁或洗涤处理。工作人员在处理传染性物品之后,离开实验室前先要洗手。

5.3.2发生明显或可能与传染物接触的溅溢及事故时,要立即向科主任报告,以作出相应的医学评价,进行监测和治疗。

5.3.3在使用紫外线照射消毒和各种化学消毒剂消毒过程中,应非凡注重防止消毒剂对实验人员和实验室仪器、物品的损害。

参考文献:

[1]微生物和生物医学实验室.生物安全通用准则[J].

[2]传染性非典型肺炎实验室生物安全操作指南[J].

[3]WHO关于处理SARS标本的生物安全准则[J].2003,4:25.

[4]关于对传染性非典型肺炎实验室标本采集与处理技术补充说明的通知[J].

[5]检验科SARS标本检测安全治理指南[J].

[6]传染性非典型肺炎人体样品采集、保藏、运输规则[J].