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育龙网核心提示: 作者:吴绍文,唐云峰,李强,李洪波,温秀琳关键词非那雄胺;多沙唑嗪;前列腺增生;动物模型;大鼠摘要:目的:探讨非那雄胺与多沙唑嗪联
作者:吴绍文,唐云峰,李强,李洪波,温秀琳

关键词非那雄胺;多沙唑嗪;前列腺增生;动物模型;大鼠

摘要:目的:探讨非那雄胺与多沙唑嗪联用对鼠前列腺增生模型的影响。方法:将34只雄性Wistar大鼠,随机分为模型组(28只)、假手术组(6只)。造模成功后将24只模型鼠随机分为非那雄胺与多沙唑嗪联用、非那雄胺、多沙唑嗪组、阴性对照组,继续予皮下注射丙酸睾酮4mg/d.kg造模,连续4周;假手术组继续予皮下注射等量橄榄油4周。各组实验鼠分别于注射4周后处死,取出前列腺,光镜下观察其形态学变化,计算各实验组前列腺指数(PI)。免疫组化检测bax、fas、bcl-2蛋白表达情况。结果:与阴性对照组相比,给药4周后非那雄胺与多沙唑嗪联用、非那雄胺组PI、bcl-2表达下降(P0.05),bax、fas表达增加(P0.05)。结论:两种药物联用显著地降低了鼠前列腺增生的进展,有望成为临床治疗前列腺增生的新方法。

关键词:非那雄胺;多沙唑嗪;前列腺增生;动物模型;大鼠

EffectsofFinasterideAssociatedwithDoxazosinonRatModelofBenignProstateHypertrophy

Abstract:Objective:ToinvestigateeffectsofFinasterideassociatedwithdoxazosinonratmodelofbenignprostatehypertrophy.Method:34maleWistarratsweredividedintoshamoperationgroup(n=6)andmodelgroup(n=28).Afterratmodelwassuccessful,Theother24modelratswererandomlydividedintoFinasterideassociatedwithdoxazosingroup、Finasteridegroup、doxazosingroup、negativecontrolgroup.Thefourgroupratswereinjectedsubcutaneouslytestosteronepropionate4mg/kg.dforfourweeks;shamoperationgroupwasinjectedsubcutaneouslythesamedoseofoliveoilforfourweeks.Allgroupswerekilledat4weeks,removedtheprostates,observedthestructuralchangesofprostatesbylightmicroscopy,calculatedtheprostateindex(PI).Theexpressionofbax、fas、bcl-2proteinwereanalysedbymeansofimmunohistochemicaltechnique.Result:Comparedwithnegativecontrolgroup,PI、bcl-2proteinofFinasterideassociatedwithdoxazosin、Finasteridegroupweresignificantlydecreased(P0.05),theexpressionofbax、fasproteinsignificantlyincreased(P0.05).Conclusion:FinasterideassociatedwithdoxazosincaninduceglandularatrophyoftheratmodelofBPH.ApplicationsofFinasterideassociatedwithdoxazosintherapycouldbecandidatedforthenewtreatmentofBPH.

Keywords:Finasteride;Doxazosin;Benignprostatichyperplasia;Animalmodel;Rat

良性前列腺增生(BPH)是老年男性常见病。60岁男性BPH的发病率超过50%,70岁以上男性发病率为90%[1]。BPH主要表现为排尿困难,影响患者的生活质量,重者可引起尿潴留、上尿路积水等一系列并发症,最终导致膀胱及肾功能损害[2]。非那雄胺为特异性的5α-还原酶抑制剂,通过对5α-还原酶抑制作用,造成前列腺组织中细胞萎缩和凋亡,缩小前列腺体积,改善尿道阻塞,从而改善前列腺增生患者的症状。多沙唑嗪为α1受体阻滞剂,作用于前列腺和膀胱颈平滑肌的α1肾上腺素受体,使膀胱颈、前列腺、前列腺包膜平滑肌松弛,尿道和膀胱阻力减低,从而减轻前列腺增生引起的尿道阻塞症状。本研究通过非那雄胺与多沙唑嗪联用对鼠前列腺增生模型的影响,探讨两药合用疗效是否优于两种药物单用的疗效。

1材料与方法

1.1材料:雄性Wistar大鼠34只,鼠龄3~6个月,体重220g~270g。购自广东医学院动物实验中心。丙酸睾酮注射液,上海第九制药厂生产,剂量100mg/1ml。bax、bcl-2、fas三种一抗均为兔抗鼠(1∶100)多克隆抗体,购自武汉博士德公司。SP免疫组化染色试剂盒、DAB显色剂、苏木素、多聚赖氨酸(Poly-Lysine)购至福建迈新公司。

1.2方法

1.2.1动物模型的建立:模型组28只雄性Wistar大鼠行去势手术,切除双侧睾丸;假手术组行相同手术,仅切开皮肤,暴露双侧睾丸,但不予切除。模型组28只Wistar鼠予皮下注射丙酸睾酮4mg/d.kg造模[3],连续1周;假手术组6只Wistar鼠皮下注射等量橄榄油,连续1周。1周后随机处死4只造模鼠,取出其右侧前列腺,HE染色,光镜下观察示鼠前列腺腺体排列明显密集,腺腔呈锯齿扩张明显,呈乳头状增生突向腺腔内;证实模型造模成功。

1.2.2药物的应用:将其余实验组24只Wistar鼠随机分为非那雄胺与多沙唑嗪联用组(15u/0.1ml)、非那雄胺组(10u/0.1ml)、多沙唑嗪组(5u/0.1ml)、阴性对照组(0.1ml生理盐水。麻醉成功后取下腹正中切口,切开腹壁进入盆腔,暴露前列腺腹侧叶,取右腹侧叶为注射部位,注射完后依次缝合各层切口。假手术组仅切开腹壁,暴露前列腺,但不行任何干预措施。术后各组继续予皮下注射丙酸睾酮4mg/d.kg维持,假手术组皮下注射等量橄榄油,连续四面。4周后处死各组实验鼠,取出前列腺。

1.2.3前列腺指数:用电子天平称各组实验鼠体重和双侧前列腺重量,计算前列腺指数(prostateindex,PI)。前列腺指数=前列腺重量(mg)/鼠体重(g)×100%。

1.2.4前列腺组织结构的观察:将各组实验鼠右侧鼠前列腺组织经10%甲醛固定、石蜡包埋、4μm连续切片,常规苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察前列腺结构。

1.2.5免疫组织化学:应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶免疫组化(SP法)对鼠前列腺体bax、bcl-2、fas蛋白的表达情况进行观察和分析。

1.3统计学方法:所有数据采用SPSS10.0统计软件包分析处理,多组间比较采用方差分析,各组间假如方差不齐则采用非参数法,两组间比较采用t检验。bax、fas、bcl-2各组间比较采用X2检验统计分析。

2结果

2.1各实验组前列腺指数(PI),见表1。

表1各实验组前列腺指数

非那雄胺与多沙唑嗪联用组与阴性对照组、假手术组、多沙唑嗪组、非那雄胺组相比有差异显著性,P0.05

2.2各实验组前列腺组织病理学变化:阴性对照组:腺体组织明显增多;腺上皮排列较为复杂,乳头状结构多见,并见乳头状延伸与对侧上皮或上皮乳头相连,形成网状结构,显示腺体上皮组织增生活跃;间质也有不同程度增生,毛细血管增生扩张、充血。非那雄胺与多沙唑嗪联用组、非那雄胺组、多沙唑嗪组与阴性对照组相比,腺体成分呈不同程度减少,间质相对增多,非那雄胺与多沙唑嗪联用组和非那雄胺组可见腺体四周平滑肌较正常组织体积增大。非那雄胺与多沙唑嗪聪组、非那雄胺组、多沙唑嗪组相比,以非那雄胺与多沙唑嗪联用组腺体萎缩明显,非那雄胺组次之,多沙唑嗪组最后。但多沙唑嗪组腺体与2周时相比,腺体成分增多,上皮细胞增生明显,呈增生状态,间质相对减少。

假手术组:腺体组织被覆单层立方或矮柱状上皮,基底膜完整,游离缘可见纹状缘,腺上皮排列规则,无乳头状结构,腔内可见分泌物,腺体无囊性扩张。给药前后镜下结构无差别。

2.3各组实验鼠前列腺bax、bcl-2、fas表达情况:bax表达情况:非那雄胺与多沙唑嗪联用组与非那雄胺组间比较,差异无统计学意义(P0.05);非那雄胺与多沙唑嗪联用组与阴性对照组比较、非那雄胺组与假手术组比较(P0.01);多沙唑嗪组与阴性对照、假手术组比较,差异无统计学意义(P0.05);阴性对照组与假手术组比较,表达增加,差异有显著性(P0.05)。bcl-2表达情况:非那雄胺与多沙唑嗪联用组、非那雄胺组与假手术组比较,差异无统计意义(P0.05);非那雄胺与多沙唑嗪联用组、非那雄胺组与多沙唑嗪、阴性对照组比较,表达降低,差异有显著性(P0.05),其中非那雄胺组与多沙唑嗪、阴性对照组比较(P0.01);假手术组与多沙唑嗪、阴性对照组比较,表达下降,差异有显著性(P0.05);多沙唑嗪组与阴性对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。fas表达情况:非那雄胺与多沙唑嗪联用组、非那雄胺组与多沙唑嗪、阴性对照组假手术组比较,表达增加,差异有显著性(P0.05),其中非那雄胺与多沙唑嗪联用、阴性对照组(P0.01);非那雄胺与多沙唑嗪联用组、非那雄胺组比较无差异(P0.05);阴性对照组与多沙唑嗪、假手术组比较无差异(P0.05);多沙唑嗪、假手术组比较,差异有显著性(P0.05)。

表2给药4周时各组bax、bcl-2、fas表达情况

bax:①非那雄胺与多沙唑嗪联用组与非那雄胺组间比较P0.05②非那雄胺与多沙唑嗪联用组与阴性对照组比较、非那雄胺组与假手术组比较(P0.01)③阴性对照组与假手术组比较(P0.05)

bcl-2:①非那雄胺与多沙唑嗪联用组、非那雄胺组与假手术组比较P0.05②非那雄胺与多沙唑嗪联用组与多沙唑嗪、阴性对照组比较P0.05③非那雄胺组与多沙唑嗪、阴性对照组比较P0.01④假手术组与多沙唑嗪、阴性对照组比较P0.05

fas:①非那雄胺与多沙唑嗪联用组与多沙唑嗪、阴性对照组假手术组比较P0.05②非那雄胺组与多沙唑嗪、阴性对照组假手术组比较P0.05③多沙唑嗪、假手术组比较P0.05

3讨论

BPH临床表现为刺激症状如尿频、尿急、尿失禁等和梗阻症状如排尿费力、射程变短等,病程进一步发展,可出现血尿、尿路感染、尿潴留、上尿路积水等并发症,如不及时诊治,最终导致膀胱及肾功能损害。临床治疗BPH目标是缓解或减轻患者的临床症状,预防并发症,减少治疗的不良反应[4]。非那雄胺为特异性的5α-还原酶抑制剂,通过对5α-还原酶抑制作用,造成前列腺组织中细胞萎缩和凋亡,缩小前列腺体积,改善尿道阻塞,从而改善前列腺增生患者的症状。多沙唑嗪为α1受体阻滞剂,作用于前列腺和膀胱颈平滑肌的α1肾上腺素受体,使膀胱颈、前列腺、前列腺包膜平滑肌松弛,尿道和膀胱阻力减低,从而减轻前列腺增生引起的尿道阻塞症状。单用α-受体阻滞剂或5α-还原酶抑制剂经临床试验证实治疗BPH是有效的[5~7]。

本实验通过研究非那雄胺与多沙唑嗪联用对鼠前列腺增生模型的影响发现,两种药物联用显著地降低了鼠前列腺增生的进展,有望成为临床治疗前列腺增生的新方法。

参考文献

[1]WalshPC.Treatmentofbenignprostatichyperplasia[J].NEnglMed,1996,335:586-587.

[2]BarryMJ,RoehrbornCG.Benignprostatichyperplasia[J]BM,2001,323:1042-1046.

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